Alamar Blue試劑盒中主要成分為Resazurin，其是一種氧化還原指示劑，根據細胞代謝還原情況發生顏色變化。Resazurin在氧化狀態下呈現紫藍色無熒光性，而在還原狀態下，轉變為呈粉紅或紅色熒光，產生的熒光強度與呼吸活細胞數量呈正比。通過檢測呼吸過程中氧化水平，可以定量檢測細胞活力和毒性。Alamar Blue 顏色變化可通過普通分光光度計檢測吸光度變化，檢測波長為570 nm，參考波長為600 nm； Alamar Blue 熒光變化可通過熒光光度計檢測，激發波長為530-560 nm，而發射波長為590 nm。

Alamar Blue可用于人、哺乳動物、細菌、真菌和支原體細胞增殖情況的定量檢測，也可用于細胞因子生物活性、細胞活力分析、體外細胞毒性確定以及細胞生長監測。Alamar Blue檢測法具有操作簡單，使用靈活，安全可靠，靈敏度高，穩定性強，應用廣泛等優勢，適用于高通量檢測實驗。

操作說明

1)，細胞培養基中加入Alamar Blue 試劑，通常100 μl 培養基中加入10 μl 的Alamar Blue 試劑。

2)，在細胞培養箱中孵育1-6 小時，具體孵育時間與細胞種類、細胞數目有關。培養基的顏色由靛青藍開始變成粉紅色就可以進入測定。

3)，推薦使用熒光酶標儀進行檢測，激發光波長在 530-560 nm 之間，發射光波長為 590 nm，記錄相對熒光單位（RFU）。

4)，繪制標準曲線或細胞生長曲線：縱坐標（Y 軸）為相對熒光單位（RFU）；橫坐標（X 軸）為細胞數或時間點或藥物濃度。

保存條件

4 °C避光保存，一年有效。

注意事項

1)，合適密度的細胞可以增加檢測靈敏度。對于 96 孔板，我們建議細胞濃度范圍為：貼壁細胞在 100-10,000/孔，懸浮細胞在 2,000-50,000/孔。對于 384 孔板，細胞濃度和接種量均減半。

2)，注意接種細胞濃度和加入檢測試劑后孵育時間。細胞濃度過高或孵育時間過長，會導致繼發性還原反應，產生無色和熒光消失。孵育時，須避光。

3)，整個過程均應為無菌操作，因為微生物污染物同樣可以還原檢測試劑而影響實驗結果。

4)，本產品可以使用熒光或分光光度計檢測，但熒光的靈敏度高，實驗誤差小，推薦熒光檢測。